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纸片扩散法药敏试验,将细菌接种在琼脂平板表面,贴上药物纸片。纸片上的药物向周围的培养基中扩散,构成一维。琼脂平板表面的细菌生长,产生了抗药性酶,向培养基中扩散,构成另一维。所以,纸片扩散法是二维试验。三维试验,在纸片旁边的琼脂刻一深纹,其中加入受试菌液。细菌生长后,产生的抗药性酶向四周的琼脂中扩散,构成第三维。检测ESBL,接种细菌后,贴上第三代头孢菌素纸片,在纸片边上的深纹中加被测菌液。纹中的细菌生长时产生ESBL,扩散到周围的培养基中。扩散到培养基中的抗生素,遇到ESBL后被水解,不能对细菌生长产生抑制效应,形成的只能是变形的抑菌环。细菌不产生ESBL,抑菌环规则。目前,三维试验是检测ESBL的标准方法。