衣原体抗体

肺炎衣原体抗体(Cpn-PcAb)的制备及应用。

方法 用10μl Cpn菌株TW-183(2×108ifu)与300μl福氏完全佐剂混匀后皮下多点注射新西兰白兔。双向琼脂扩散法鉴定血清抗体的效价为1∶64，用硫酸铵盐析法、DEAE-Sephadex-50层析法纯化免疫球蛋白(IgG)，然后用异硫氰酸荧光素(FITG)标记IgG。用Cpn-PcAb与美国进口Cpn-单抗(Cpn-McAb)同时检测病人外周血标本294例。另外，分别从Cpn-PcAb检测出Cpn特异性抗原阳性的外周血单核细胞(PBMC)标本(A组)中和对照组(B组)中随机各挑选20例，用PCR检测PBMC中的Cpn-DNA。

结论 Cpn抗体几乎和Cpn单抗一样有较高的特异性和敏感性，可能可以替代进口单抗用于临床Cpn感染的检测，有助于相关疾病的诊治。

结果 Cpn-PcAb检测的阳性率为45.9%(135/294)，Cpn-McAb检测的阳性率为43.5%(128/294)，两种抗体同时阳性的标本有110例，Kappa值是07，根据其判断标准提示两者有较高的一致性。A、B两组Cpn-DNA阳性标本分别为17例和3例。

1.1 兔抗肺炎衣原体抗体的制备 用10μl Cpn菌株TW-183(2×108ifu)与300μl福氏完全佐剂混匀后皮下多点注射新西兰白兔(New Zealand white，NZW)，在第14、28和42天，用10μl Cpn菌株与300μl福氏不完全佐剂混匀后皮下多点注射NZW，用双向琼脂扩散法鉴定其抗血清效价＞(1∶64)后，颈动脉插管放血55ml，分离出血清25ml，用硫酸铵盐析法、DEAE-Sephadex-50层析法逐步纯化兔免疫球蛋白(IgG)，用考马氏亮蓝法测其蛋白含量为3.45mg/ml。

1.2 肺炎衣原体抗体荧光素结合物的制备 将纯化的IgG抗体用pH 9～9.5碳酸盐缓冲液透析过夜，配制异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiacyanate，FITC)二甲亚砜(DMSO)溶液，使终浓度为1mg FITC/1ml DMSO。按50μg FITC/1mg IgG比例将FITC-DMSO溶液逐滴加入透析后的抗体溶液中。标记物用pH 9～9.5碳酸盐缓冲液加至2.5ml，再将其装入透析袋，并放在预冷4℃的碳酸盐缓冲液中，于4℃暗处磁力搅拌过夜。然后用PBS于4℃暗处透析5次，以除去游离的FITC，直至透析外液与参比溶液PBS在495nm处吸光度一样。FITC标记物分别在276nm和493nm测定光密度，然后根据计算图算出荧光素(F)与蛋白(P)mol比值，合适的F/P比值为2～4。