酶消化对培养脐静脉内皮细胞的影响

　　体外培养脐静脉内皮细胞(HUVEC)是体外研究血管内皮细胞的结构、功能及与内皮细胞有关疾病的发病机制的重要方法之一。酶消化对脐静脉内皮细胞培养的成功与否有重要影响。我们用不同浓度的胰酶，在37℃下，作用不同时间，观察酶消化作用对脐静脉内皮细胞分离培养的影响，总结出最佳的酶消化条件，为培养内皮细胞的成功奠定基础。

　　1材料和方法

　　1．1 用无氯化钙的PBS缓冲液配制胰蛋白酶(美国DiFco产)，使其浓度分别为0．1％、0．125％和0．25％。

　　1．2 新生儿脐静脉，恒温水溶锅，培养皿，三通注射器。

　　1．3 配制常规培养，10．4g RPMI 1640(美国R．Sclentificln)溶于100ml去离子水中，加入100u/ml的青、链霉素各10ml，用抽滤方法过滤除菌，并加入灭活小牛血清，使其浓主为15％，并用无菌的1NNaoH或1N的HCL调PH值在7．1～7．2。分装后置冰箱内备用。

　　1．4 0．01mol/L磷酸盐(PBS)缓冲液的配制，NaO2HPO42．9g，NaH2PO40．3g，Nacl8．5g加蒸馏水1000ml，用INNaoH或1NHa调PH值7．4左右，高压灭菌。……

　　参考文献：

　　［1］张宝庚，陈铁镇，董玉兰，等．人脐静脉及大鼠主动脉内皮的培养．中华心血管病杂志，1985，13(1)：32