胶原最佳冻干浓度的选择

 　　摘要　目的：选择胶原的最佳冻干浓度。方法：特可考海绵体的辅料成分胶原由马肌腱提取。对不同浓度的胶原溶液制成的冻干品进行各种性能的比较。结果：胶原最佳冻干浓度(胶原量/溶液体积)为1/60。结论：1/60浓度的胶原膜制备简单，且性能很稳定。

　　中图分类号　R982

Studies on Screening the Best Lyophilized Concentration of Collagen

Zhu Hong, Chen Liuying

　　(Nanjing Nanda Pharmaceutical Co., Ltd.Nanjing 210093)

　　TachoComb(特可考)是一种可吸收的外科手术止血、堵漏的新型敷料，使用方便、安全可靠。它是质地轻而多孔的海绵状膜，一侧附有黄色药层。其海绵体即胶原制成的基质辅料，由从马肌腱提取的胶原溶液冻干制成。本文着重讨论胶原冻干的最佳浓度。

　　1　材　料

　　马肌腱，内蒙古产。

　　Dura-Dry冻干机，美国；ZK高速自控组织捣碎机，江苏盐城龙岗科学仪器厂。

　　2　方　法

　　2.1　胶原冻干膜的制备［1］

　　新鲜马肌腱，除净肌腱膜、脂肪，用水洗净，称重，剪成2 mm2的小块，加入0.1%醋酸浸泡36 h(分别在12、24、36 h匀浆3次)，过60目尼龙滤布，加固体NaCl至浓度达10%，离心、收集胶原沉淀，蒸馏水洗涤3次，加入0.1%醋酸浸泡18 h、匀浆，除去不溶物，冷冻干燥，密封包装。共制备3批胶原冻干膜。

　　为确定胶原的最佳冻干浓度，我们选取5个浓度的胶原溶液，制备冻干膜，并进行性能检测。所选

　　浓度分别为：1/30(即1 g新鲜马肌腱制成30 ml胶原溶液，以下同)、1/40、1/50、1/60、1/70。

　　2.2　性能检测

　　2.2.1　鉴别　取本品约1 cm2加胶原酶溶液(胶原酶10 mg溶于pH 7.4 Tris缓冲液10 ml中)5 ml，放入37℃水浴振摇，1 h后供试品应全部溶解。

　　2.2.2　酸度　取本品100 mg，加水100 ml，搅拌30 min后，测定，pH值为4.0～7.0。

　　2.2.3　吸水力　取本品约2 cm×2cm，精密称定，浸入20℃的水中，待吸足水分，用小镊子轻轻夹住一角，提出水面停留1 min后，精密称定，吸收的水分不得少于供试品重量的25倍。

　　2.2.4　抗撕强度　取本品约4 cm×2 cm，量取其厚度，另取与供试品相同宽度的金属夹子两个，分别夹住上下宽边，使夹子与长边垂直，且夹子之间的距离为2 cm。垂直固定上端，下端悬挂砝码，以供试品30 s内不撕裂为判断标准，将砝码的重量与两夹子间供试品体积的比值作为抗撕强度。抗撕强度不得低于200 g/cm3。

　　2.2.5　干燥失重　取本品约30 mg，精密称定，在105℃干燥5 h［2］，减失重量不得过16%。

　　2.2.6　炽灼残渣　取本品约150 mg，依法［2］检查，遗留残渣不得过2.0%。

　　2.2.7　胶原含量　取本品约10 mg，精密称定，照氮测定法［2］测定，测得的含氮量与5.55相乘，即得供试品中含有胶原蛋白的重量。其胶原蛋白含量应为1.3～2.0 mg/cm2。

表1　不同浓度胶原冻干膜的性能测试结果

浓度

　　(g/ml)
 鉴　别 酸度

　　(pH值)
 吸水力

　　(倍)
 抗撕强度

　　(g/cm3)
 干燥失重

　　(%)
 炽灼残渣

　　(%)
 含量测定

　　(mg/cm2)
 
1/30 2 h内全溶 3.72 68.1 ＞200 10.59 0.80 4.34
1/40 1.6 h内全溶 3.64 37.9 ＞200 10.62 0.73 3.89
1/50 1.6 h内全溶 4.02 61.4 ＞200 12.67 0.70 2.05
1/60 1 h内全溶 4.10 27.8 ＞200 14.70 1.51 1.85
1/70 1 h内全溶 3.95 62.3 ＞200 10.50 0.93 1.58

　　3　结果与讨论

　　不同浓度胶原冻干膜的性能测试结果见表1。

　　由表1可见，鉴别实验中只有1/60和1/70两个浓度的胶原膜能在1 h内被胶原酶完全降解。胶原被胶原酶降解快慢直接影响到胶原用于伤口后在体内被吸收的快慢程度。

　　酸度检测结果各浓度胶原膜普遍偏酸，pH均在4.0左右。要想提高pH，还需改进工艺。

　　吸水力实验结果表明各浓度胶原膜吸水力良好。抗撕强度及干燥失重，炽灼残渣实验结果表明各浓度胶原膜均在性能要求之内。

　　含量测定结果表明各浓度胶原膜中，1/60和1/70浓度的胶原蛋白含量在1.3～2.0 mg/cm2之间。1/30、1/40、1/50浓度的胶原蛋白含量均偏高，不利于在体内被很好地吸收。另外，1/30、1/40浓度的胶原溶液太粘稠，冻干装盘时不易铺平，使冻干成品膜厚薄不一。

　　综上所述，1/60和1/70浓度胶原膜性质较为相近，其制备工作也较为简单易行。考虑到1/70浓度的胶原膜吸水力强，当用于体内时它吸收的血也多，这对于止血后药膜的体内吸收造成一定困难。所以我们选择1/60浓度作为胶原的最佳冻干浓度。

　　我们制备了几批此浓度的冻干膜，均符合性能要求，且性能稳定，可作为仿制特可考的辅料。

参考文献

　　1，US patent,2,973，302.Purification of Collagen

　　2，中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典(二部).1995(附录)∶43～59