沙土鼠脑缺血耐受诱导的实验研究

　　近年来文献报道，在致死性脑缺血前1～7天予以非致死性脑缺血，可明显减轻后一次缺血引起的神经损害，称此现象为脑缺血耐受或脑缺血预处理。本实验旨在观察脑缺血预处理是否确能诱导脑缺血耐受。

　　材料与方法

　　动物模型与分组　采用沙土鼠全脑缺血模型，全脑缺血2分钟作为缺血预处理，3天后，全脑缺血5分钟，造成后续的缺血损伤。缺血时，观察瞳孔变化及翻正反射情况。若瞳孔散大，翻正反射消失，说明产生全脑缺血；相反，则认为未产生全脑缺血，应剔除，再灌注后，观察沙土鼠恢复情况，注意有无神经功能异常，如上睑下垂、瞳 孔固定、四肢瘫痪、癫痫样运动等。随机分成四组，经筛选后计有沙土鼠25只，非缺血对照组(A组，n＝5)；预处理对照组(B组，n＝6)，全脑缺血2分钟；缺血预处理(C组，n＝7)，全脑缺血2分钟，间隔3天后再次脑缺血5分钟；缺血对照组(D组，n＝7)，脑缺血5分钟。

　　观察方法　末次缺血后，沙土鼠常温饲养7天，灌杀取脑。在视交叉后1mm及4mm处冠状切面切开鼠脑，取中间切块以观察海马组织，石蜡包埋。将海马分成CA1、CA3、CA4亚区及齿状回区结合高精度显微测微尺，计数CA1亚区1mm内未 损伤的锥体细胞。

　　数据用±s表示。多组用单因方差分析，组间比较用q检验。P＜0.05认为有显著性差异。

　　结　果

　　缺血后一般情况　沙土鼠颈动脉被夹闭后，观察到瞳孔散大，翻正反射消失，说明产生全脑缺血；有3只沙土鼠在缺血中因反射无明显抑制，瞳孔无变化者，认为未造成严重缺血而被剔除。

　　缺血后的组织形态学变化　非缺血组(A组)没有细胞的破坏，预处理对照组(B组)海马CA1区锥体细胞大部分保存完好，与A组比较无明显差别。缺血组(D组)所有的沙土鼠显示海马CA1区锥体细胞几乎全部遭到破坏。而先预处理缺血2分钟间隔3天再缺血5分钟，发现CA1锥体细胞保存较完好，基本呈正常细胞形态，核仁清楚，胞核呈卵圆形，与缺血组比较有显著差别。

　　讨　论

　　本实验采取2分钟脑缺血作为预处理，3天后再次脑缺血5分钟，发现CA1区锥体细胞大部分得以幸存；而无预处理的缺血组，CA1锥体细胞几乎全部遭到破坏。脑缺血耐受的特点是通过适当短暂的脑缺血过程诱导出机体内源 性神经保护机制，从而加强神经元耐受致死性脑缺血应激的能力。其保护作用的产生是一个较复杂的过程，从缺血应激到保护作用的开始所需的特定时间间隔，与基因激活并翻译成蛋白质或其他因子所需时间大致相当。另外，有几个方面机制可能与缺血耐受有关，包括：第二信使系统改变，膜通道下调；腺苷大量释放，激活腺苷A1受体，加强神经调节作用；某种早立基因的表达，如C-Jun；氧自由基清除剂合成增多；蛋白合成能力早期恢复等。总之，脑缺血耐受的产生机制需进一步研究。