PCR技术在艾滋检测中的应用

pcr可用来追踪hiv的自然感染史。可在其它血清学和病毒学标志出现前检测病毒序列，这样可判定无症状而且血清阴性患者潜在的hiv的传播性；可用来监测长潜伏期（4～7年）病人，以及在抗病毒治疗期间病毒的水平；也可用于hiv-1血清阳性母亲的婴儿的hiv检测。在婴儿出生后最初的6～9个月期间，他们的血液中存在母体的抗体，因此用pcr可判定婴儿是否真正被hiv感染。

　　（一）血清抗体阳性病人hiv序列的检测

　　有人从aids或arc病人的外周血单核细胞培养物，精液细胞和精液上清制备dna。然后用pcr法和逆转录酶测定法分别检测hiv-1。pcr扩增产物与32p标记的探针退火之后用bstni消化。再进行聚丙烯酰胺凝胶电泳和自显影。结果表明，在逆转录酶阴性的28个细胞系中有9个以及用逆转录酶法不能确定的9个细胞系中有2个为阳性。这说明过去许多细胞培养物认为是阴性者，实际上用更敏感的pcr测定时则为阳性。

　　从血清阳性的hiv感染者的外周血单核细胞中可检测出前病毒序列。通过共培养分离出病毒的血清阳性的同性恋男人血液制备的dna，用pcr可100%检出病毒序列；用血清阴性共培养阴性同性恋者的标本，经pcr扩增检出病毒序列者为64%，血清阴性正常人标本pcr检测也为阴性，表明未出现假阳性结果。由于hiv-1基因组的广泛的异源性，为提高检测的阳性率可采用多种引物（如ltr，gag和env基因的引物）。利用pcr法从313份已证实为抗体阳性的标本中检测出310份hiv阳性（99%）。

　　(二)血清抗体阴性病人的hiv序列的检测

　　由于在感染hiv后到出现免疫反应之前有一段滞后期,这个血清学阴性的滞后期通常长达6周至6个月,而且无抗体产生期可能更长些.在此期间受感染者往往检测不到抗体,因此,血清阴性的人也可能已感染hiv.pcr法在高危人群中检测到hiv-1比由血清学转阳确诊的时间可以提高6个月.对少数初次共培养呈阴性的人,甚至可在血清转阳之前24～39个月就能确诊为hiv-1感染.对血清学试验结果不能确定者,也可通过pcr作进一