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摘要：目的观察小鼠和大鼠口服通脉活血灵胶囊的急性毒性和长期毒性作用。方法采用最大给药量法测定小鼠口服通脉活血灵胶囊的最大耐受量；采用3个剂量（9.0，4.5，1.5 g /kg ）iq SD大鼠，连续180 d，观察给药90，180 d时大鼠的生长发育、血液学、血液生化学、组织病理变化及停药30 d时上述指标的变化。结果小鼠口服通脉活血灵胶囊的最大耐受量为36.0 g /kg。大鼠连续给药90 d时， 9.0 g /kg肌酐比空白对照组升高（P<0.01）；肾重量系数增高（P<0.01）； 2只大鼠肾脏近曲小管上皮细胞高度水肿，轻度脂肪变性，管腔变大，肾小管内可见红细胞管型，肾间质少量炎细胞浸润；2只大鼠肝细胞脂肪变性。给药180 d时，9.0 g /kg和4.5 g /kg剂量组肌酐升高（P<0.01或P <0.001）； 9.0 g /kg剂量组总蛋白升高（P<0.01）;肝、肾脏系数增高（P<0.01）； 3只大鼠肾脏近曲小管上皮细胞高度水肿，轻度脂肪变性，管腔变大，肾间质少量炎细胞浸润。2只大鼠肝细胞轻度脂肪变性；停药30 d后，大鼠体重、摄食量、活动、外周血象、重要器官脏器系数均正常，病理学检查各组各脏器均未发现明显改变。 结论 通过对通脉活血灵胶囊180 d用药过程中各项指标反应的观察认为，通脉活血灵胶囊在规定剂量下服用是安全可靠的。
关键词：通脉活血灵胶囊； 急性毒性； 小鼠； 大鼠； 长期毒性
Toxicologic Study on Tongmaihuoxueling Capsule
LI Lanfang, ZHANG Jianxin, LI Guofeng, XU Tao
(Hebei Academy of Medical Science, Shijiazhuang 050021,China)
Abstract：Objective To observe the acute toxicity in mice and the long-period toxicity Tongmaihuoxueling Capsule(TMHXL) in rats. Methodsthe maximum administration dosage(MAD) of TMHXL were determined by iq administration in mice . Body weight,hematological and hematobiochemical parameters,coefficient and histomorphological figure of organs(the heart, liver, spleen ,lungs, kidneys, adrenals, testes, prostate, paucreas, uterus, brain, thymus) were examined in 90 days,180 days and 30 days after the cessation of TMHXL. ResultsThe MAD of TMHXL by iq administration was greater than 36.0g/kg in mice. In the long-period toxicity test , after administered repeatedly for 90 days, in 9.0g/kg dose group, Crea increased（P<0.01）; the epithelium cells edema of proximal convoluted tubule and fat degened, lumens broadend in two, the fat in liver cells were degenerated in two rats. After administerd repeatedly for 180 days, in the 9.0 g/kg dose groups,the TP and Crea increased(P<0.01orP<0.05);The weight coefficients of kidneys and liver were larger in high dose group than that of in control group; the epithelium cells edema of proximal convoluted tubule and fat degened, lumens broadend in three; the fat in liver cells were degenerated in two rats. In the 4.5 g/kg dose groups the Crea increased(P<0.05). In 30 days after stopping the drug, the changes of Crea, TP, hematobiochemical,pathological and coefficient of organs could completely recover. ConclusionIt could be concluded that TMHXL is safe to be administrated in the dose prescribed .
Key words：Tongmai-huoxueling Capsule; Acute toxicity; Rat; Mouse； Long-period toxicity
通脉活血灵胶囊是以“益气活血、通经活络”为治疗原则组成的中药复方，主要由丹参、川芎、三七、大黄、槐米等十几味中药组成，经过工艺研究制成的胶囊剂。经临床试验证明有降低血脂，改善血液流变性的作用［1］。药效学实验证明对实验性高脂血症大鼠有降低总胆固醇、甘油三酯，改善血流变，抑制血小板聚集等作用［2］。对家兔实验性动脉粥样硬化有明显的抑制作用［3］。为给临床用药提供安全的实验依据，本文对通脉活血灵胶囊进行了毒理学研究。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 动物昆明种小鼠，18~22 g，合格证号：第04035；SD大鼠，80~100 g（6周龄），合格证号：第04036，均由河北省实验动物中心提供。动物实验室环境：温度18~25℃，湿度45%~55%。
1.1.2 药物 通脉活血灵胶囊，由河北省医学科学院药物研究室研制，批号：20000326。实验前用蒸馏水配成不同浓度的混悬液灌胃使用。
1.1.3 仪器Eppendorf EcomF 6124型半自动生化分析仪，德国倍肯公司； CA500型自动血球计数仪，日本AITAIKE公司的；JA2003型电子天平，上海精密科学仪器有限公司。
1.1.4 试剂盒AST（石家庄试剂厂,20001015）、ALT（保定长城,20000620）、ALP（保定长城,20001117）、BUN（保定长城,20001309）、TP（保定长城,20000708）、ALB（保定长城,20001020）、GLU（保定长城,20001109）、TBIL（保定长城,20001201）、Crea（保定长城,20001123）、TCHO（北京中生,000901）。
1.2 方法
1.2.1 小鼠口服急性毒性实验根据预实验结果，未测出通脉活血灵胶囊iq给药的LD50，因此取20只小鼠，按文献方法［4］实验，禁食12 h，以质量体积分数为40%的给药浓度，0.4 ml/10g体重的给药体积，2次/d，间隔6 h，iq复方消经痛胶囊每次16 g /kg，观察14 d，记录动物死亡及毒副反应症状。实验结束时，将全部动物处死，解剖，肉眼检查主要脏器组织病变情况，计算小鼠口服复方消经痛胶囊的最大耐受量。
1.2.2 大鼠长期毒性实验［5,6］将大鼠按性别和体重随机分为4组，空白对照组和高剂量组（9.0 g /kg）每组40只，中(4.5 g /kg)、低剂量组（1.5 g /kg）每组30只，雌雄各半。各组均灌胃给药，每周灌胃6 d，给药体积为30 ml/kg体重，对照组灌胃等体积蒸馏水，连续给药180 d。给药前及给药期间每周称动物体重1次，并按平均体重调整给药量。实验期间每天观察大鼠一般状态、体征、摄食量、饮水及粪便状况。每周称体重、摄食量1次，了解对动物体重和进食的影响。给药90 d，于末次给药后24 h，空白对照组和高剂量组各抽取大鼠10只（♀5 ♂5）；给药180 d，于末次给药后24 h空白对照组和各给药组各抽取14只大鼠（♀7 ♂7）；停药后30 d各组抽取8只大鼠（♀4 ♂4），用乌拉坦麻醉，从腹主动脉取血，分三批杀取动物，检查血液学和血液生化学指标。血液学检查项目为：血色素（Hb）、血小板（PLT）、红细胞计数（RBC）、网织红细胞计数（RC）、白细胞计数（WBC）、白细胞分类（DC）、凝血时间。血液生化学检查项目为：天门冬氨酸氨基转换酶（AST）、丙氨酸氨基转换酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）、尿素氮（BUN）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、血糖（GLU）、总胆红素（TBIL）、肌酐（Crea）、总胆固醇（TCHO）。取血后立即剖取动物心、肝、肾、脾、肺、肾上腺、甲状腺、胸腺、睾丸、附睾、卵巢、子宫、脑、前列腺等脏器称重，根据体重计算器官重量系数；进行肉眼观察后用10%的甲醛溶液浸泡固定，作组织切片，HE染色，光镜下检查病理学变化。
2 结果
2.1 小鼠急性毒性实验2次/d iq通脉活血灵胶囊32.0 g /kg后，动物活动，进食进水未见任何异常。观察14 d动物无死亡。肉眼尸检未见主要脏器组织明显异常。通脉活血灵胶囊小鼠口服最大给药量>32.0 g /kg。
2.2 大鼠长期毒性实验
2.2.1 对大鼠一般状况的影响
给药180 d及停药30 d期间，高、中剂量组和空白对照组各死亡动物1只，肉眼尸检未见明显病变。高剂量组给药后20 d后摄食量梢有增加，部分动物软便；其余各组大鼠的自主活动、饮水、摄食、排泄等均未见异常反应。各给药组动物在各时间的体重分别与对照组体重比较，均无明显差异。实验结果表明，通脉活血灵胶囊连续用药180 d，对大鼠的生长发育等一般状况无毒性影响。结果见表1。表1 复方消经痛胶囊连续给药90 d、180 d和停药30 d对大鼠一般情况和体重的影响（略）
2.2.2 对血液学的影响通脉活血灵胶囊各给药剂量组对大鼠连续给药90 d和180 d和停药后30 d，各血液学检查指标与对照组比较均无显著性差异，并且均在正常值范围。结果见表2。表明连续服用通脉活血灵胶囊180 d，对各给药组大鼠血象基本无明显影响。表2 对大鼠血液学的影响（略）
2.2.3 对血液生化指标的影响通脉活血灵胶囊连续给药90 d，9.0 g/kg组肌酐较对照组升高（P<0.01）；给药180 d时，9.0 g/kg剂量组总蛋白、肌酐升高（P<0.05或P<0.001）；4.5 g/kg剂量组肌肝生高（P<0.05）；其它检测值均正常。停药30 d（恢复期）各组大鼠生化指标均无异常。结果见表3。连续服用通脉活血灵胶囊180 d时引起的肌肝、总蛋白升高。停药后30 d恢复正常。表3 对大鼠生化指标的影响（略）
2.2.4 通脉活血灵胶囊对大鼠主要脏器系数的影响通脉活血灵胶囊连续服用90 d时，各组大鼠各主要脏器重量系数与空白对照组比较，高剂量组肾重量系数增高（P<0.01）。连续给药180 d，9.0 g/kg组肝、肾重量系数增高（P<0.05或P<0.01），中剂量组肾重量系数增高（P<0.01）。恢复期时各个剂量组脏器重量系数与空白对照组比较均无明显差异。说明通脉活血灵胶囊连续服用180 d中，高剂量组大鼠的肾脏和肝脏重量系数有一定影响，停药后可恢复。对其余各给药剂量组各脏器系数无明显影响。表4 对大鼠主要脏器系数的影响（略）
2.2.5 通脉活血灵胶囊对大鼠重要器官组织病理形态的影响连续给药90 d时，高剂量组2只大鼠肾脏近曲小管上皮细胞高度水肿，轻度脂肪变性，管腔变大，肾小管内可见红细胞管型，肾间质少量炎细胞浸润。2只大鼠肝细胞脂肪变性。给药180 d时，高剂量组3只大鼠肾脏近曲小管上皮细胞高度水肿，轻度脂肪变性，管腔变大，肾间质少量炎细胞浸润。2只大鼠肝细胞轻度脂肪变性。其余各脏器未见明显异常改变。停药恢复30 d时，各给药剂量组大鼠各脏器组织病理切片未发现病理改变。
3 讨论
3.1 通脉活血灵胶囊成人临床用量为0.13 g/kg ，小鼠2次/d iq通脉活血灵胶囊32.0 g/kg，相当于临床成人（按60 kg计）每日口服剂量的256倍，属实际无毒级［7］。
3.2 通脉活血灵胶囊9.0，4.5，1.5 g/kg 3个剂量（相当于临床用量的90，45，15倍）灌胃SD大鼠，1次/d，连续90 d，高剂量组与空白对照组比较，服药20 d后部分摄食量梢有增加，软便；对大鼠的其它状态（外观形态、活动、饮水等）无明显影响；血液学检查未发现明显毒性作用。血液生化检查，高剂量组动物肌酐值增高（P<0.01）；肾重量系数增大（P<0.01）；病理学检查，高剂量组2只大鼠肾脏近曲小管上皮细胞水肿，轻度脂肪变性，管腔变大，肾小管内可见红细胞管型，肾间质少量炎细胞浸润。2只大鼠肝细胞脂肪变性。连续给药180 d时，高剂量组动物血清肌酐值增高（P<0.01），总蛋白增高（P<0.05）；肝、肾重量系数增大（P<0.05，P<0.01）；中剂量组肾脏重量系数增高（P<0.01）。病理学检查，高剂量组3只大鼠肾脏近曲小管上皮细胞高度水肿，轻度脂肪变性，管腔变大，肾间质少量炎细胞浸润；2只大鼠肝细胞轻度脂肪变性。停药30 d，各个剂量组各项检查与空白对照组比较均无明显差异。说明通脉活血灵胶囊连续服用180 d中，高剂量组大鼠的肾脏和肝脏功能，重量系数和组织形态学有一定毒性影响，但停药30 d后可恢复。提示肝、肾损伤的患者长期服用时应检测肝肾功能。综合分析认为，通脉活血灵胶囊在规定剂量下服用是安全可靠的。
参考文献：
［1］高福来，沈梅萍，王进华，等.通脉活血灵治疗高粘血症75例［J］.中国医学学报，1996，11（2）：57.
［2］李兰芳，刘赤平，兰漫野，等. 通脉活血灵胶囊对大鼠实验性高脂血症的影响［J］.解放军药学学报，1999，15（1）：19.
［3］李兰芳，陈灵燕，张建新，等. 通脉活血灵胶囊对实验性高脂血症家兔血脂及动脉粥样硬化的影响［J］.中草药，2000，31（6）：440.
［4］国家药品监督管理局.中药新药研究的技术要求［S］.1999：11.
［5］袁伯俊，王治乔.新药临床前安全性评价与实践［M］.北京：军事医学科学出版社，1997：23.
［6］周立国.药物毒理学［M］.武汉：湖北科学出版社，2001：20.
［7］赵秀文.谈新药毒理实验的技术要求［J］.中药通报，1988，13（7）：53.
(河北省医学科学院，河北 石家庄 050021)
作者简介：李兰芳(1950)，女(汉族)，河北安新人，现任河北省医学科学院研究员，主要从事药物研究工作.