在性传播疾病中,支原体感染与非淋菌性尿道炎的发生密切相关,也可引起前列腺炎、附睾炎、不育及妇女上下生殖道的炎症等。根据国内目前实际情况，现介绍常见的３种支原体，即 解脲脲原体(解脲支原体,Uu)、人型支原体(Mh) 和生殖支原体(Mg)的实验室诊断。 中国人民解放军总医院第一附属医院皮肤科张云杰

一、解脲支原体(Uu)感染的实验室诊断:

(一)分离培养方法

Uu在含95% 氮气和5%CO2 环境中生长良好。其生长最适pH为5.5-6.5,最适温度为36℃-37℃。Uu具有尿素酶，能分解尿素产氨，使含酚红指示剂的Uu液体培养基pH值上升，颜色由黄色变为红色。再将液体培养物转种到Uu固体培养基上，能生长成具特征性油煎蛋样集落。

(1 )液体培养基：支原体肉汤培养基80mL，马血清或小牛血清10mL，酵母浸液10mL,

10 %尿素溶液0.5mL-1.5mL, 0.4%酚红溶液0.5mL,青霉素(使其在培养基中的浓度为500U/mL-2000U/mL,)用1N HCl 调pH值至5.5-6.5, 用小试管分装后置冰箱中备用，每管1.5-2.0mL。

(2 ) 固体培养基：在100mL 支原体肉汤培养基中，加入琼脂1.2-1.4g, ,高压灭菌后冷却到 50 ℃左右，逐一加入上述添加剂。摇匀，倒入无菌平皿中，待凝固后，置冰箱中备用。

接种标本后，经孵育，若培养基发生由黄变红的颜色变化，透明无混浊(有别于某些细菌及 真菌生长)则可初步判断为有支原体生长。大多数Uu在24h内可获得阳性结果。如果培养基发生颜色变化，但液体又有混浊，则应排除杂菌污染, 可用0.45μm滤膜过滤后，作再接种观察。进一步诊断需将液体培养物接种到固体培养基上培养, 经Dienes法染色后在低倍显微镜下观察集落形态。阴性结果最好观察５天。Uu 在固体培养基上集落核心呈粗颗粒状,具极窄的边，有时呈油煎蛋样。如用 Dienes 法染色，集落为特异的蓝色。一般细菌的菌落不着色，容易鉴别。

(二)代谢抑制试验

根据特异性抗体能阻止支原体的生长和代谢这一特性，可用病人血清进行代谢抑制试验。在加有抗血清的培养基中，支原体的代谢受到抑制，从而阻止了培养基的颜色改变。

代谢抑制试验也可用于检测感染支原体患者血清抗体的滴度。即将血清作10倍连续稀释后，滴入支原体培养液，并以不加血清的支原体试验管和不加支原体液的培养基管作对照。经37℃培养，不加抗血清的培养管支原体应生长良好，培养基变成红色(Uu或Mh)，未加支原体液培养基管颜色不变。未发生颜色变化的最高血清稀释度为代谢抑制试验的抗体滴度。

(三) 间接血凝试验

在一定条件下，抗体和相应抗原相遇，可形成抗原抗体复合物。这种复合物分子团很小,不能形成肉眼可见的反应。用经鞣酸处理的红细胞作载体，将抗原吸附在其表面，使红细胞致敏，待与相应的血清抗体相遇时，可出现肉眼可见的凝集现象。

(四)生长抑制试验

特异性抗体能阻止支原体的生长和代谢。用直径为6mm-8mm的圆形灭菌滤纸片，以未稀释抗血清浸透后放入无菌平皿内，于４℃下干燥后待用。 吸取待检菌液0.5mL涂布于固体培养基上，置３7℃使琼脂表面稍干燥。以无菌操作镊取抗血清纸片放于琼脂表面,培养4日-5日后,在低倍显微镜下观察滤纸片周围有无支原体生长。若滤纸片周围无菌落生长，出现抑菌圈大于2mm者表示该支原体与抗血清系同种免疫原，小于2mm判为异种。

(五)分子生物学诊断方法

目前主要应用聚合酶链反应(PCR)法及DNA探针技术作诊断。前者具有高度特异性和敏感性、且快速、简便。但操作要求极为严格。

聚合酶链反应的原理是DNA片段扩增，其中支原体引物的选择是PCR检测技术中的关键。1９９1年Willonghby 设计的引物来自脲酶基因。Zheng等（1995）用MB抗原基因引物对所有14个血清型的Uu均显示良好的PCR扩增效果，其敏感性较Willonghby设计的脲酶基因引物更好。

二、人型支原体(Mh)感染的实验诊断方法:

分离培养方法 人型支原体在有氧及无氧环境中均能生长，在液体培养基中2日-3日，固体培养基上培养4日-5日即可生长成集落。生长条件除需胆固醇外，尚需要精氨酸。生长的最适pH 为7.0，最适温度36℃-37℃。人型支原体具有精氨酸脱氢酶，能水解精氨酸产氨，使含酚红指示剂的Mh液体培养基pH值上升，呈碱性，颜色由橙黄色变为红色。Mh和Uu一样，不发酵葡萄糖，这与Mg有区别。将液体培养物转种到固体培养基上，能生长成具有特征性的油煎蛋样集落。培养基中不加尿素，需加入精氨酸，其它营养成分与Uu相同。观察结果同Uu。

Mh的其它实验诊断方法与Uu同。

三、生殖支原体(Mg)感染的实验室诊断方法:

Mg能发酵葡萄糖和其他碳水化合物，使培养基pH值下降呈酸性，但即使降至6.0以下，Mg仍可存活。Mg不能分解精氨酸及尿素。它营养要求复杂，须在特殊的SP- 4 培养基中才能生长, 而且生长极缓慢,若在液体培养基中加入特异性抗血清，使血清与Mg结合，可抑制其分解葡萄糖产酸的能力。Mg在固体培养基上，置于含5％-10% CO2和90%-95%的氮环境中，可形成油煎蛋样集落。因此，分离培养的难度较大。而血清学诊断因其与肺炎支原体有广泛的交叉反应而受到限制。这些都给诊断Mg感染带来困难。

(一)、分离培养方法 Mg在一般支原体培养基中不生长，需在不含醋酸铊的SP - 4培养基中生长。因Mg发酵葡萄糖可使含酚红指示剂的培养基出现由红色变为黄色的变化。在固体培养基上，在合适的环境中，可形成油煎蛋样集落。用分离培养方法对 Mg作出确诊，在实际应用中尚有一定难度。 血清学诊断试验：目前尚无可靠的方法。

(二)、分子生物学诊断试验

目前主要应用DNA探针及PCR技术检测Mg。前者敏感性较差，后者具有高度的敏感性和特异性，能测出10－15g Mg的NDA，又有快速和简便等优点。因此，用PCR检测Mg，为实验室诊断提供了重要手段。