胰腺癌细胞系ASPC-1凋亡过程中bcl-2和bcl-xL的表达

　　ASPC-1细胞系于含体积分数为10%胎牛血清DMEM培养基中传代培养。将细胞浓度调整至1×109个/L，无血清培养24 h。向培养基内加入IFN-r(终浓度1×106?U/L)。继续培养，分别于6、12和24 h收集细胞进行检测。以不加IFN-r的培养皿为对照组。收集的细胞洗涤后用荧光染料碘化丙啶(PI)染色，然后进行流式细胞分析。细胞凋亡数量以凋亡细胞的百分数表示。

　　bcl-2和bcl-xL的检测采用免疫印迹(western blot)法。收集的细胞裂解后聚丙烯酰胺凝胶电泳约45 min(电压160 V)。电泳后蛋白质转移至硝酸纤维膜上。将硝酸纤维膜于加有抗bcl-2和bcl-xL多克隆抗体(Santz Cruz)的缓冲液中孵育1 h，清洗后再于过氧化物酶标记的二抗缓冲液中孵育1 h。最后通过ECL系统显影、曝光、冲洗胶片、分析。

　　二、结果

　　传代的ASPC-1细胞经无血清培养并加入IFN-r刺激后出现细胞凋亡，且随时间延长凋亡数量逐渐增多。对照组bcl-2和bcl-xL都为轻度表达(表1)

　　表1　ASPC-1细胞凋亡过程中bcl-2和bcl-xL的表达(±s)

组别 时间

　　(h)
 bcl-2 bcl-xL
对照组 　 90.76±

　　13.09
 78.90±

　　21.12
 
IFN-γ组 6 93.67±

　　9.29
 130.33±

　　26.21*
 
　 12 88.09±

　　5.57
 232.33±

　　34.31*
 
　 24 129.69±

　　12.74
 106.02±

　　39.05*
 

　　注：数值单位为相对吸光度　　与对照组比较，*P＜0.05

　　三、讨论

　　本研究结果显示，在ASPC-1细胞凋亡过程中，bcl-2和bcl-xL表达，但两者的表达规律不同。bcl-xL表达随着凋亡细胞的增多而逐渐减弱，而bcl-2则在细胞凋亡增多时强表达，说明在ASPC-1的凋亡过程中存在着抗凋亡机制。