陈   琳

　　清华大学第二附属医院（玉泉医院）神经外科中心

　　细胞学治疗是神经修复干预策略的重要组成部分，在包括肌萎缩侧索硬化（运动神经元病）、脊髓损伤、脑性瘫痪、早老性痴呆等众多神经系统难治性疾病中有广阔的临床应用前景，具有药物难以替代的地位。进入21世纪后，获得长足进展，为本领域研究提出了一条新思路，给普遍悲观束手无策的治疗现状带来了希望之光，其中一些临床研究突破了“渐冻人”无任何方法逆转病情的传统观念。本文检索Pubmed数据库将相关内容作一汇总，供同道们参考。清华大学玉泉医院神经外科陈琳

　　一、              人脐血细胞（Human umbilical cord blood, HUCB）

　　美国新泽西州医学院研究者认为肌萎缩侧索硬化是一种自身免疫性疾病，高剂量的HUCB 单核细胞能够延缓SOD1-G93A小鼠的起病和延长生存。选取23 只小鼠，其中2只在出现瘫痪前其他原因死亡。剩余小鼠分为3组：第1组4只：未接受治疗对照组；第2组6只：接受antikiller血清+800cGy放射照射+5×106同类系骨髓单核细胞；第3组11只：接受antikiller血清+800cGy放射照射+34.2~35.6×106HUCB单核细胞（使用前保存在4℃可透气贮存袋中17~20天。结果平均生存期：对照组127天，第2组138天，第3组148天（p < 0.001 HUCB vs 对照组, p < 0.01 HUCB vs BM）（Ende N, et al. Life Sci. 2000;67（1）:53-9）。

　　美国南佛罗里达州大学将人脐血细胞输注到出现症状前的SOD1-G93A小鼠，可推迟发病2~3周，并延长生存期。细胞进入脑和脊髓实质运动神经元变性区域后可以存活10~12周，表达神经标记物（Nestin、III Beta-Tubulin（TuJ1）、GFAP）。作用机理包括细胞替代和神经保护，但因脐血单核细胞子代细胞中表达神经类抗原数量少，故以调节自身免疫后运动神经元保护为主（Garbuzova-Davis S, etal. J Hematother Stem Cell Res. 2003;12（3）:255-70）。

　　二、              人胚生殖细胞（embryonic germ cell）

　　美国Johns Hopkins大学医学院采用来自人胚生殖细胞的胚状体衍生（embryoid body-derived，EBD）细胞注射到大鼠脑脊液后，12~24周瘫痪大鼠部分恢复运动功能。体外实验发现，EBD细胞能分泌α-转化生长因子（TGF-alpha）和BDNF。作者认为，这类细胞能够加强宿主神经元的存活和功能改善（Kerr DA , et al. J Neurosci. 2003;23（12）:5131-40）。

　　三、              骨髓间充质细胞（Bone marrow mesenchymal cell, BMMC）

　　意大利米兰大学证实野生型骨髓细胞能够改善SOD1-G93A小鼠发病时间和生存期。机理可能是“非神经环境效应”，而不是神经发生（Corti S, et al. Brain. 2004 Nov;127（Pt 11）:2518-32）。

　　意大利Torino大学的临床研究：脊髓内植入自体骨髓间充质细胞。骨髓取自棘髂后上棘，体外扩增后，细胞与2ml脑脊液混悬，移植入脊髓。结果4例患者有肋间神经疼痛，平均术后3天缓解；5例患者下肢感觉减退，术后6天缓解（Mazzini L, et al. Amyotroph Lateral Scler Other Motor Neuron Disord. 2003;4（3）:158-61）。随后本组7例患者3年随访报告称4例患者线性恶化趋势延缓（Mazzini L, et al. Neurol Res. 2006;28（5）:523-6）。

　　四、              神经干细胞（neural stem cell, NSC）/神经祖细胞（human neural progenitor cells，hNPC）/前体细胞（precursor）

　　美国得克萨斯大学报道人神经干细胞衍生的胆碱能神经元，重新支配固有运动神经元缺失后的成年大鼠骨骼肌。他们发现移植的神经元发出轴突，行经脊髓腹侧根和坐骨神经，最终形成神经-肌肉接头，与部分运动改善相关（Gao J, et al. Neuroscience. 2005;131（2）:257-62）。意大利米兰大学研究者认为，神经干细胞亚群（LewisX+ CXCR4+）对SOD1-G93A小鼠的保护作用是通过神经发生和生长因子释放起效（Corti S, et al. Brain. 2007;130（Pt 5）:1289-305）。

　　美国威斯康辛州大学从皮层分离人神经祖细胞（human neural progenitor cells，hNPC）扩增培养基因修饰后分泌GDNF，移植到SOD1-G93A大鼠腰脊髓后，细胞可以存活11周以上，细胞整合进入灰质和白质并分泌GDNF（Klein SM, et al. Hum Gene Ther. 2005;16（4）:509-21）。

　　美国Johns Hopkins大学医学院将星形胶质前体细胞植入SOD1-G93A大鼠颈髓，可以减少小胶质细胞增生，对起病、病程、呼吸和前肢功能有积极作用（Lepore AC, et al. Nat Neurosci. 2008;11（11）:1294-301）。

　　五、              Sertoli细胞

　　Sertoli细胞的作用类似“护理细胞（nurse cell）”，能够分泌多种细胞保护蛋白，支持其他细胞的功能。美国卡罗来纳医学中心发现Sertoli细胞脊髓实质内植入SOD1-G93A小鼠有效，移植部位在L4~L5前角，细胞数量1×105。（Hemendinger R, et al. Exp Neurol. 2005;196（2）:235-43）。

　　六、              胚胎干细胞（embryonic stem cells，ESC）

　　澳大利亚新南威尔大学报道体外使用多种分化因子如维甲酸、Shh、BMP-2及Wnt3A等，将3个人胚胎干细胞系（hES 3.1, hES 3.2, hES 3.3）高产率成功诱导分化为脊髓运动神经元，为将来细胞替代补充奠定基础。（Lim UM, et al. Curr Neurovasc Res. 2006;3（4）:281-8）。美国纽约Memorial Sloan-Kettering癌症中心也报道了将人胚胎干细胞在MS5间质培养基上诱导分化可移植的运动神经元方法，移植到成年大鼠脊髓后，能形成含有大量人运动神经元的细胞移植体，并长出胆碱乙酰转移酶阳性纤维（Lee H, et al. Stem Cells. 2007;25（8）:1931-9）。

　　七、              hNT细胞

　　hNT细胞是一种多能神经元样细胞，美国南佛罗里达大学将衍生自人畸胎瘤细胞系的hNT细胞多点注射入SOD1-G93A小鼠腰髓。hNT细胞纤维生长为0.15~0.3 mm，绝大多数分布在灰质内（Garbuzova-Davis S, et al.  Amyotroph Lateral Scler. 2006;7（4）:221-6）。

　　八、              CD4+ T细胞

　　美国休斯顿Methodist神经研究所通过小鼠骨髓移植实验，证实CD4+ T细胞在调节胶质细胞营养/细胞毒平衡的基础上，能发挥其神经保护作用，延缓疾病进展（Beers DR, et al. Proc Natl Acad Sci U S A. 2008;105（40）:15558-63）。

　　九、              造血干细胞（hematopoietic stem cell, HSC）

　　美国休斯顿Methodist神经研究所报道6例患者先全身放射治疗，周围血同种异体造血干细胞输注。结果表明，细胞可以进入受体中枢神经系统运动神经元病理变化部位，发挥免疫调节细胞的作用，但目前尚未发现临床疗效，虽然将来有望作为基因治疗的载体。（Appel SH, et al. Neurology. 2008;71（17）:1326-34）

　　十、              嗅鞘细胞（olfactory ensheathing cells, OECs）

　　美国Johns Hopkins大学医学院报道成年小鼠嗅球神经前体细胞移植入脊髓，可保护mSOD1小鼠肌萎缩侧索硬化模型的运动神经元退变，改善运动功能，延长生存时间。他们先获取成年小鼠嗅球的多潜能神经前体细胞（OB-NPCs），在临床前期（70d龄）移植到肌萎缩侧索硬化转基因小鼠模型的脊髓内。结果发现，OB-NPCs能减少运动功能损害和丧失。与对照组的90d开始发病比较，平均延至117d，生存期也延长至170d（对照组140d）。免疫组化染色提示移植的OB-NPCs可分化为大乙酰胆碱转移酶阳性脊髓神经元、中间神经元和胶质细胞。新的神经元能发芽生长形成髓鞘化的轴突和突触，且发现新生轴突长入周围神经。OB-NPCs还能分化成少突胶质细胞和星形胶质细胞（Martin LJ, Liu Z. J Neuropathol Exp Neurol. 2007;66（11）:1002-18）。Tottori大学神经科学研究所报道的鞘内联合注射嗅鞘细胞和间充质细胞也是一个新思路（Morita E, et al. Exp Neurol. 2008;213（2）:431-8）。

　　中国研究小组的研究报告，证实了人胚嗅鞘细胞移植在肌萎缩侧索硬化有效性，此项临床研究选取了35例确诊病人，其中15例病人接受嗅鞘细胞移植，20例不接受移植，为空白对照组。经培养的嗅鞘细胞悬液移植注射到双侧放射冠（额叶锥体束）。最主要的终点效果评价标准采用国际上通用的肌萎缩侧索硬化症功能量表总分的变化。所有病人进行了5次评估，开始点及随访4次每月1次。最后，31例病人（14例嗅鞘细胞移植组，17例对照组）完成了4个月的随访研究。分析病人临床资料，功能量表总分及变化在开始点和研究的前2个月，没有差异。在最后2个月，治疗组比对照组功能恶化显著减慢。在最后1个月，治疗组病人中，7例仍有神经功能恶化逆转，比术前改善，2例状态保持稳定，另外5例功能量表总分平均减少4.4分。17个对照组病人中，只有1例病人病情保持稳定，其余16例病人的量表功能总分平均减少6.5分（Huang H, et al. Clin Transplant. 2008 Jul 31）。