p53、c-Myc在血吸虫感染的原发性肝癌患者肝癌组织中的表达及...

    发布时间:2015-01-02   来源:中华康网   

 荆州市第二人民医院肝病科朱刚剑

[摘要] 目的:对有血吸虫感染的肝癌患者肝癌组织中p53、c-Myc蛋白的表达及其与肝癌生物学行为进行研究,探讨血吸虫感染与肝细胞癌的关系。方法:58例原发性肝细胞癌患者分为两组:原发性肝细胞癌伴有血吸虫病组(HCS组)23例和原发性肝细胞癌不伴有血吸虫病组(HC组)35例。采用免疫组织化学SP法检测所有患者的p53、c-Myc蛋白表达;同时对p53、c-Myc与肝细胞癌的多种临床病理参数的相关性进行分析。结果:p53 蛋白阳性表达率在两组中分别为73.9%(17/23)和31.4%(11/35),两组间存在显著性差异(P<0.01);而c-Myc 蛋白阳性率在HCS组和HC组中无显著性差异 (P>0.05)。p53及c-Myc在肝癌组织中的检出率与肝外转移、术后复发及肿瘤分化程度明显相关 (P<0.05或0.01) 。结论:血吸虫感染对肝癌细胞中p53 突变蛋白的过量表达有一定的促进作用。p53及c-Myc在肝癌组织中的检出率与代表肿瘤不良生物学特征的指标肝外转移、术后复发及肿瘤分化程度明显相关。联合检测p53、c-myc在肝细胞癌中的表达,可作为估价肝细胞癌生物学行为的参考指标。

[关键词]  血吸虫病;肝细胞癌; p53;c-Myc

中图分类号:R532.21;R735.7           文献表识码:A 

文章编号:1006-5709(2008)12-0000-03  收稿日期:2008-06-15

Expression and significance of p53 and c-Myc in hepatocellular carcinoma with schistosomiasis

ZHU Gangjian1, LI  Yan2

1.NO.1 Department of Hepatic Disease, the Second People’s Hospital of Jingzhou, Jingzhou, 434000; 2.Department of Clinical Laboratory,  People's Hospital of Wuhan University, China.

[Abstract] Objective  To investigate the relationship between p53 gene and c-myc gene expression and the clinicopathological factors of hepatocellular carcinoma and the effect of schistosomiasis on p53,c-myc gene expression.Methods Fifty-eight patients of hepatocellular carcinoma were selected and divided into two groups: HCS group (hepatocellular carcinoma with schistosomiasis, n=23) and HC group (hepatocellular carcinoma without schistosomiasis, n=35). Immunohistochemistry method were used to detect the p53 and c-myc proteins expression of all the 58 patients. Results  The positive rates of p53 protein expression in HCS group and HC group were 73.9% (17/23) and 31.4% (11/35) respectively, and there were significant differences between two groups (P<0.01). The positive rates of  p53 and c-myc  in the HCC tissue were significantly correlated with the presence of extrahepatic metastasis, the recurrence  of  tumor and the differentiation of tumor (P<0.05 or 0.01). Conclusion  There was higher gene mutation rate in the patients of hepatocellular carcinoma complicated with schistosomiasis, which suggests that schistosomiasis can promote p53 mutation proteins over-expression in the histiocytes of HCC. The above evidences indicate that detecting the expressions of  p53 and c-myc could be considered as reference indexs on evaluating biological behavior of HCC.

[Key words ]: Schistosomiasis; Hepatocellular carcinoma (HCC); p53 ; c-Myc

 

血吸虫病是一类与肝细胞癌关系密切且危害极大的传染性疾病,迄今为止,无论是基础研究还是流行病学调查,尚未证实血吸虫感染与肝细胞癌的发生之间存在必然的联系。分子生物学的快速发展,为血吸虫病的研究提供了新的思路和方法。从分子水平检测血吸虫感染后基因的变化,对探索血吸虫感染与肝细胞癌的关系具有重要意义。p53基因是重要的抑癌基因,其突变失活在肿瘤的发生过程中起重要作用;c-Myc是常见的激活癌基因,它能导致细胞的恶性转化。本课题应用免疫组织化学方法对伴有日本血吸虫病的肝细胞癌患者肝癌组织中p53、c-Myc蛋白的表达及其与肝癌生物学行为进行研究,探讨血吸虫感染与肝细胞癌的关系。

 

材料与方法

1.1 标本来源 58例肝细胞癌患者的手术标本来源于荆州市第二人民医院、荆州市中心医院及荆州市第一人民医院1996年 ~ 2004年的外科住院病人。其中男47例,女11例,年龄23 ~ 68岁,40例乙肝表面抗原(HBsAg)阳性。全部病例均进行肝脏外科手术,获得肝脏手术标本或取得足够的活检材料,并有相应的癌旁组织(距肝癌 2 cm )。标本均经病理学检查证实为肝细胞癌,诊断符合2001年肝癌诊断标准[1]。其中原发性肝细胞癌伴有血吸虫病组(hepatocellular carcinoma with schistosomiasis ,简称HCS 组))23 例,男女比例为19∶4,16例HBsAg阳性。原发性肝细胞癌不伴有血吸虫病组(hepatocellular carcinoma ,简称HC 组)35 例,男女比例为28∶7,24例HBsAg阳性。两组患者年龄、性别、病程、临床症状、伴发HBsAg阳性的差异均无统计学意义。本研究中血吸虫病包括慢性血吸虫病和晚期血吸虫病,无急型血吸虫病。

1.2 试剂与方法   p53 、c-Myc单克隆抗体,链霉菌抗生物素蛋白--过氧化物酶(SP) 染色试剂盒均购自福州迈新生物科技公司。p53 、c-Myc检测采用SP免疫组化染色法。试验步骤按试剂盒说明书进行。所有标本用10%甲醛固定,石蜡包埋;每蜡块行 4 mm 厚连续切片三张。先脱蜡至水,后微波抗原修复;置

3%过氧化氢孵育 15 min,磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗 5 min×3次,阻断内源性过氧化氢酶活性。封闭非特异性抗原,孵育后显色复染,常规封片。每批切片染色均设PBS代替一抗作阴性对照,以已知的阳性片作阳性对照。另外,每份标本取一张组织切片作HE染色,用作常规组织病理学观察和复核诊断。

1.3 结果判断标准 免疫组化染色阳性信号呈棕褐色或棕黄色, p53定位于细胞核, c-Myc定位于细胞浆和细胞核。染色结果观察采用双盲法,由两位病理科医生在不知病理分级与临床资料的情况下读片,细胞计数方法为:每张切片随机选择5 个高倍视野(200倍),每个视野计数100 个肿瘤细胞中的阳性细胞数,取阳性细胞数百分比的平均值。阳性细胞百分比 ≥ 10%定为阳性,阳性细胞百分比 < 10%或无着色者定为阴性。

1.4 统计学处理 采用SPSS10.0统计软件,两组间均数比较用t检验,率的比较采用卡方检验。

 

结果

2.1  p53、c-Myc蛋白在肝细胞癌中的表达  p53 蛋白阳性细胞在癌组织多以弥漫分布(见图1)。p53 蛋白阳性表达率在HCS组和HC组中分别为73.9%(17/23)和31.4%(11/35),两组间存在显著性差异(χ2=10.03,P<0.01)。c-Myc 蛋白阳性细胞在癌组织中呈弥漫、灶状分布(见图2)。c-Myc 蛋白在HCS组和HC组中的阳性率分别为52.2%(12/23)和42.9%(15/35),两组间无显著性差异 (χ2=0.48,P>0.05)。

           

图1 p53 在肝癌组织中的阳性表达;图2 c-Myc 蛋白在肝癌组织中的阳性表达(SP 200×)   

Fig 1  Immunohistochemical staining for p53 protain positive in the HCC tissue;Fig 2  Immunohistochemical staining for c-myc protain positive  in the HCC tissue

 

2.2  p53及c-Myc的表达及与临床病理参数的情况 58例肝细胞癌患者按临床分期、有无门静脉癌栓及肝外转移、有无术后复发、肿瘤直径、血清AFP水平、HBsAg 状况以及肿瘤分化程度( 按照Edmondson 法分级) 等进行分组。p53 的表达率与临床分期(χ2=3.54,P>0.05)、肿瘤大小(χ2=3.35,P>0.05)、肿瘤个数(χ2=1.07,P>0.05)、门脉癌栓(χ2=1.28,P>0.05)、HBsAg 状况(χ2=0.55,P>0.05)都无显著相关性,但与肝外转移(χ2=7.45,P<0.01)、术后1年复发(χ2=7.66,P<0.01)、肿瘤分化程度(χ2=5.62,P<0.05)及血清AFP水平(χ2=7.52,P<0.01)明显

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