血管紧张素转换酶基因插入/缺失多态性检测方法的研究

　　目的：血管紧张素转换酶(ACE)是肾素—血管紧张素系统(RAS)中的一个关键酶。ACE基因I/D多态性与高血压靶器官损伤有密切关系。检测ACE基因多态性。目前国内仍普遍应用Rigat法，此方法可造成错误分型，在国外已被其它方法取代。本文采用三条引物法进行ACE基因型检测，并与Rigat法进行比较，以探讨我国人群中用Rigat法造成DD型的错检率，并用新方法重新报道我国汉族人群ACE基因型的频率分布。方法：原发性高血压病人(EH)239例，正常血压者180例。基因分型方法：(1)Rigat法：引物1：5’CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT3’，引物2：5’GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT 3’。(2)三条引物法：引物1：5’CATCCTTTCTCCCATTTCTC 3’，引物2：5’TGGGATTACAGGCGTGATACAG 3’，引物3：5’ACTTCAGAGCTGGAATAAAATT 3’。结果：1. Rigat法与三条引物法对ACE基因分型结果比较：对于Ⅱ型两种方法的分型结果完全一致， 对DD、ID型分型结果不一致， Rigat法得出的DD型比例较三条引物法高。以三条引物法为标准， Rigat法对DD型的错判率为13.5%。2.用三条引物法检测，汉族正常人ACE基因型频率分布为：Ⅱ型(54%)，ID型(38%)，DD型(8%)，经χ2检验，符合Hardy-Weinberg平衡，(χ2=0.071, P=0.965)。3.对EH组的239例患者同时分别用两种方法进行基因型检测，ACE基因型频率分布为： Rigat法：Ⅱ型(38%)，ID型(46%)，DD型(15%)；三条引物法：Ⅱ型(38%)，ID型(48%)，DD型(13%)。两种方法结果均符合Hardy-Weinberg平衡，χ2=0.149, P=0.928(Rigat法)和χ2＝0.120, P=0.928(三条引物法)。4.ET组与正常组基因型分型结果比较：两组间DD型频率无显著性差异，χ2＝3.308，P＝0.069。结论：三条引物法一次完成基因分型，且特异性、准确性、重复性都很好，在国外已被普遍采用。但国内一直沿用Rigat法进行ACE基因分型，用此法报道的国人DD型频率大多在20%左右，有的甚至高达30%，明显高于新加坡(10%)、香港(13%)、台湾(13%)等地的测定报道。本文用三条引物法得到的DD型频率(正常人组8%，高血压组13%)，与上述新、港、台华人及日本人(12%)的结果相近。因而用三条引物法取代Rigat法，不仅可克服ACE基因DD型的错误分型，而且也是开展ACE基因多态性与心血管病关系国际合作研究的迫切需要。